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水分测定仪-卡氏干燥炉联用测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量

来源:生物化工 浏览 57 次 发布时间:2024-07-09

注射用重组人干扰素α2a是由高效表达人干扰素α2a基因的大肠杆菌,经发酵、分离和高度纯化后获得的冻干制剂,含适宜稳定剂,不含防腐剂和抗生素[1],主要用于治疗病毒性疾病及肿瘤。水分含量是注射用重组人干扰素α2a的一项重要指标,影响药品的外观、性状、含量、稳定性等。水分含量越低,药品越能长期稳定的储存。


本文参照《中国药典》2015年版通则0832水分测定法中容量滴定法,利用水分测定仪-卡氏干燥炉联用技术测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量,其原理为样品在干燥炉内加热,使其水分在高温下蒸发释放,蒸发出来的水分由干燥载气(空气或氮气)推送入水分测定仪进行测定[2]。联用干燥炉可自动完成测定,提高工作效率;密封盖能够保证样品在测定过程中不受环境的影响,同时避免了样品在滴定杯中的相互干扰,使滴定杯始终保持良好的状态,测定结果重复性好,准确度高。


1实验部分


1.1主要仪器


V30水分测定仪(METTLER TOLEDO)、Stromboli加热炉样品转换器(METTLER TOLEDO)、超微量电子天平(芬兰kibron)。


1.2试剂


无水甲醇(国药集团化学试剂有限公司)、1 mg/mL费休氏试液(Merck)、2 mg/mL费休氏试液(Merck)、5 mg/mL费休氏试液(Merck)、固体标准水(Merck)。


1.3实验样品


注射用重组人干扰素α2a(长春生物制品研究所有限责任公司)。


1.4测定步骤


1.4.1操作条件


加热炉样品转换器加热温度:(150±2)℃;加热炉样品转换器加热时间:10 min;费休氏试液滴定度:1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL。


1.4.2样品测定


启动仪器,加入适量无水甲醇,待仪器平衡后,用10μL微量进样器量取经称量的10μL纯化水(精确至0.01 mg)加入到滴定杯中,仪器显示质量后按“确定”键,仪器开始自动滴定,到达终点时,屏幕显示费休氏试液的滴定度。按此法标定三次,取三次标定的平均值,即为本次费休氏试液的滴定度。


将注射用重组人干扰素α2a捣碎,称取样品适量(精确至0.01 mg),记录样品质量,将样品密封后置于卡氏干燥炉上。在水分测定仪输入样品质量,用费休氏试液滴定至终点。


2结果与讨论


2.1加热炉样品转换器加热温度及终止时间的选择


加热炉样品转换器的温度直接影响样品中水分的蒸发;终止条件也是影响测定结果的关键因素,加热时间太短,样品中的水分未完全蒸发,导致测定结果偏低;加热时间太长,则延长了测定时间,环境因素的影响变大,因此需要选择合适的终止时间和加热温度[3]。试验分别选择自动终止、加热10 min和加热15 min作为终止条件,在不同的终止条件下分别选择了140、150、160℃作为加热温度,每种条件下连续进样6次。结果见表1、表2、表3。结果表明,当选择自动终止条件时,三个加热温度的样品结果的RSD相对较大;当选择10 min和15 min作为终止条件时,加热温度为150℃和160℃时,样品结果的差异较小。因此选择加热温度150℃,终止条件为10 min比较合适。

表1自动终止条件下不同加热温度的样品水分测定结果

表2加热10 min条件下不同加热温度的样品水分测定结果

表3加热15 min条件下不同加热温度的样品水分测定结果


2.2称样量的选择


在150℃加热10 min的测定条件下,样品称样量也会对测定结果有影响[4]。分别称取0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09 g、0.10g、0.11g、0.12g的样品质量,考察样品称样量对测定结果的影响,结果见图1。从图中可以看出,仪器测得样品水分含量随着加入样品质量的增大逐渐趋于稳定,当单次加入的样品质量较小时,测得结果偏高[5]。称量样品质量在50~120 mg结果无明显差异。

图1不同样品质量的测定结果


2.3费休氏试剂滴定度对测定结果的影响


在150℃加热10 min的测定条件下,不同滴定度的费休氏试剂对测定结果有影响。分别采用滴定度为1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL的费休氏试剂,考察不同滴定度的费休氏试剂对测定结果的影响,结果见表4。结果表明,不同滴定度的费休氏试液对测定结果无明显差异。

表4不同滴定度的测定结果%


2.4重复性试验


在150℃加热10 min的测定条件下,采用滴定度为1 mg/mL的费休氏试剂,用卡氏干燥炉自动进样法测定样品中水分含量,样品测定6次,计算6次结果的相对标准偏差(RSD%)数据见表5。结果表明测定结果具有良好的重复性。

表5重复性试验结果


2.5回收率试验


在样品中加入精密称取的标准水加标水平分别为0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg,在150℃加热10 min的测定条件下,采用滴定度为1 mg/mL的费休氏试剂,每个加标水平重复测定3次,经测定,加标回收率在91.8%~100.1%,结果见表6。


3结论

表6准确度试验结果

本文考察了影响水分测定仪-卡氏干燥炉联用法测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量的因素,建立了该制品水分的检测方法。研究结果表明,加热温度及加热时间对该制品水分的测定具有一定影响。实验也考察了样品称量质量及费休氏试剂滴定度对测定结果的影响。当样品称量质量较小时,天平称量误差及仪器漂移引起的误差将对实验结果产生显著影响,实验结果明显偏高;费休氏试剂滴定度对测定结果无显著影响。实验使用固体标准水对实验方法进行确证,实验结果相对稳定。因此,采用水分测定仪-卡氏干燥炉联用测定注射用重组人干扰素α2a中水分含量,选择干燥炉150℃加热10 min,样品称量质量50~120 mg作为检测条件时,其操作过程方便简洁,且方法准确可靠,符合实际样品的检测需求。