筛选获得一株生物表面活性剂产生菌，经生理生化与16S rDNA鉴定，获得菌株为铜绿假单胞菌147（Pseudomonas aeruginosa 147）。发酵产物经过薄层色谱、红外扫描分析其发酵产物为糖脂类生物表面活性剂（Biosurfactant，BS），单因素最佳发酵条件优化为碳源、氮源和碳氮比分别为花生油、硫酸铵和25∶1，最佳培养温度为30℃，pH值为8，NaCl浓度为5 g·L-1。在最佳条件下培养36 h，发酵液的表面张力值比原来降低了42.08 mN·m-1，且能平稳保持至144 h。在108 h细菌生物量最大，为2.63 g·L-1，此时产生的糖脂最多，可达2.02 g·L-1。生物表面活性剂对不同环数的多环芳烃类物质（荧蒽、芘、苯［a］芘）的增溶效果实验表明：随生物表面活性剂添加量的增大，不同PAHs溶解度均增大；相同浓度生物表面活性剂添加条件下，高环多环芳烃（苯［a］芘）的增溶效果低于低环多环芳烃（荧蒽、芘）。

多环芳烃（Polycyclicaromatichydrocarbons，PAHs）是一类由2个或2个以上苯环组成的稠环化合物。其水溶性低，易吸附于固体颗粒，能够长期存在于环境中，是一类持久性有机污染物，也是美国国家环境保护局（U.S.Environmental Protection Agency）确定的优先控制的污染物。由于PAHs高脂溶性，低生物可利用性，使得人们将其用于环境中的修复措施和效果存在局限。因此通过利用表面活性剂的胶团化作用，显著提高疏水性有机化合物在水相中的表观溶解度，从而提高其生物有效性，促进修复效果的表面活性剂强化修复技术（Surfactant enhanced remediation，SER）引起人们的关注。

目前在有机污染修复过程中使用的多为化学表面活性剂。由于化学表面活性剂不易降解、易造成二次污染、对土壤微生物产生毒害风险，限制了其在环境修复中的应用。生物表面活性剂以其具有降低表面张力、稳定乳化液等的作用，其主要成分糖脂、磷脂、脂蛋白或脂肽类化合物、高分子化合物和脂多糖，能够被生物完全降解，安全无毒，且用量少，发酵成本低，逐渐成为研究热点。已有文献报道通过筛选产表面活性剂的细菌，并将其应用于多环芳烃污染的修复。

生物表面活性剂合成方式包括动植物细胞内提取法、酶合成法、微生物发酵法。然而，动植物细胞内提取法受到原料来源的制约，难以大规模生产，酶合成法所用酶制剂的价格亦极大限制了其发展。相比而言，微生物发酵以其生产工艺简单、经济安全的特点，成为重要的生物表面活性剂来源。目前，已有很多微生物被发现能够产生生物表面活性剂，如细菌类球拟酵母（Torulopsis bombicola）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerug-inosa），其中铜绿假单胞菌已有Pseudomonas cepacia CCT6659、Pseudomonas aeruginosa S6等见诸报道。它们产生的生物表面活性剂是目前在多环芳烃污染土壤修复，石油污染修复等应用较多，生物表面活性剂在增溶多环芳烃时具有生物降解性、低毒性、适应极端环境的优势。

本研究以PAHs为目标污染物，筛选产生物表面活性剂的菌株，并分析发酵产物为生物表面活性剂，优化发酵条件，探讨菌株产生的生物表面活性剂对典型多环芳烃荧蒽、芘、苯［a］芘的增溶作用，研究结果将为PAHs污染环境的修复技术研究提供菌株资源和基础理论支撑。

1材料与方法

1.1供试土壤

采集南京炼油厂附近土样、北京某加油站附近土样、南京某河底淤泥和南京某湖底淤泥为土壤样品。

1.2供试培养基与试剂

富集培养基：（NH4）2SO410.00 g，KCl 1.10 g，KH2PO43.40 g，K2HPO44.40 g，MgSO40.50 g，EDTA 1.00 g，酵母粉0.50 g，液体石蜡5.00 mL，pH 7.0～7.4，FeSO4·7H2O 0.01 g，用蒸馏水定容到1.00 L。

LB液体培养基：10.00 g蛋白胨，5.00 g酵母粉，10.00 g氯化钠，用无菌水定容至1.00 L。

LB固体培养基：在LB液体培养基加入15.00～20.00 g琼脂粉。

无机盐培养基：（NH4）2SO41.00 g，NaCl 10.00 g，KH2PO40.20 g，K2HPO40.80 g，MgCl20.50 g，CaCl20.05 g，FeCl20.01 g。

血平板培养基：购自南京便诊生物科技有限公司。

实验试剂：甲醇为色谱纯，花生油为食用级，其他试剂均为分析纯。

1.3细菌筛选和鉴定

1.3.1表面活性剂产生菌血平板初筛

取5.00 g新鲜土样置于装有45 mL富集培养基的250 mL三角瓶中，28℃、150 r·min-1摇床培养7 d，待培养液混浊后，吸取5 mL培养液重新转接入新的富集培养基中，按上述条件培养，转接3次。后经浓度梯度稀释，100μL涂布于血平板，30℃培养48h，选择透明圈较大的菌落，分离纯化，4℃保存。

1.3.2表面张力仪复筛

将上述纯化的菌种接种于LB液体培养基中，200 r·min-1、30℃培养96 h后，用表面张力仪测定细菌发酵液的表面张力。

1.3.3细菌鉴定

基于细菌形态与生理生化结果，根据《伯杰氏细菌鉴定手册》做出初步鉴定。同时将菌株用LB液体培养基培养至对数生长期，离心法收集菌体，并采用SDS-CTAB法提取总基因组DNA，以细菌通用引物27F和1492R进行16S rDNA的PCR扩增，运用分子学鉴定菌株。