全球领先的表面张力仪测量技术——精确快速测量动静态表面张力

热线:021-66110810,66110819,66110690,13564362870 Email: info@vizai.cn

荣誉客户/Honor customers

               

拜耳公司

               

同济大学

                

联合大学

                

美国保洁

                

美国强生

               

瑞士罗氏

当前位置首页 > 新闻中心

Delta-8使用新方法测试CMC,而不是表面张力测试法——方法

来源:Unisense 浏览 137 次 发布时间:2021-09-03


方法


设备和材料。设备。使用96孔荧光板读数器(Sepctra Max-Gemini EM,Molecular Devices,Sunnyvale,CA)和96浅孔荧光板(Greiner Bio-one,Kremsmuenster,Austria)。


材料。用于验证该方法的所有标准化合物均购自Fisher Scientific/AG Scientific/Aldrich/Acros/Tocris/MP Biomedicals或从Novartis存储库获得,无需进一步纯化即可使用。


缓冲器。pH 7.2 N-2-羟乙基哌嗪-N0-2-乙磺酸(HEPES)缓冲液、20 mM含0.1 mM乙二胺四乙酸(EDTA)(MP biomedicals,Solon,OH)和pH 4.8乙酸缓冲液,使用40 mM。


荧光染料。NN-Dimethyl-6-propionyl-2-naphthylamine(Prodan)购自Fisher Scientific(Fair Lawn,NJ)。


阴离子脂质。1,2-Dioctanoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine(sodium salt)(diC8PS)购自Avanti Polar Lipids Inc.(Alabaster,AL)。


样品制备。测试化合物的储备溶液。将测试化合物以10、1或0.1 mM的浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO)中。对于在上述浓度下不能完全溶于DMSO的化合物如庆大霉素,则使用蒸馏水代替。


脂质溶液。从Avanti购买的diC8PS氯仿中的50 mg/mL储备溶液在氯仿/甲醇(5:1 v/v)中进一步稀释,得到16 mg/mL的浓度,不使用时储存在80°C。将4 mL该溶液转移到一个干净的20 mL玻璃小瓶中,并在温和的氮气流下蒸发溶剂。将干燥的脂质膜分散在10 mL的20 mM HEPES缓冲液、0.1 mM EDTA、pH 7.2中,最终浓度为6 mg/mL。使用前将溶液剧烈涡旋,置于60℃水浴中孵育45分钟。该溶液在不使用时储存在4°C,然后在使用前用上述相同的HEPES缓冲液稀释以获得4和1 mg/mL溶液。染料溶液。Prodan溶解在甲醇中制成0.3 mg/mL的储备溶液。溶液的容器用箔包裹并在室温下避光储存。在加入样品溶液之前,使用甲醇将溶液稀释至0.05 mg/mL。

图2.在不同浓度的脂质diC8PS下记录的荧光发射,范围从64μg/mL到3.47 mg/mL。在对照中,添加纯DMSO代替测试化合物(O),1.1 mg/mL的急剧上升标志着diC8PS的CMC。将10μL的10 mM硫利达嗪(9)引入基质(20 mM HEPES缓冲液中的diC8PS),CMC转移到较低浓度(0.042 mg/mL)。RFU:相对荧光单位。


样品板制备和测量。通过混合10μL化合物储备溶液(用于对照的纯DMSO)、10μL Prodan溶液和正确量的脂质溶液制备样品板,使最终脂质浓度为3.3、2、1、0.8、0.5、0.25、0.1、0.08、0.06、0.006和0.0006 mg/mL,每孔总体积为110μL,通过添加缓冲溶液进行调整。来自10、1和0.1 mM DMSO储备溶液的最终药物浓度分别为910、91和9.1μM。使用Spectra Max-Gemini EM读板器读取板,激发波长为360 nm,发射波长为430 nm。临界胶束浓度的测定。将荧光读数与脂质浓度作图。CMC被定义为浓度点,高于该浓度点荧光信号的增强是浓度的函数,如图1所示。双相线性图的截距由诺华IT开发的内部Microsoft Excel工作表自动确定。Microsoft Excel工作表通过从数据中的点的移动窗口中寻找最佳R2值来定位最适合垂直线性曲线的值。其余数据用于水平线性曲线。通过从垂直曲线中减去水平曲线来计算截距点,即CMC值。对照实验中的交点代表培养基基质中脂质的CMC。


测定重现性。为了测试测定的再现性,一些化合物在不同的测定日期进行了多次测试。连同在每个测定日期运行的对照数据,变异系数(CV)的范围为4%到8%,表明当前方法具有良好的重现性(图1)。


Delta-8使用新方法测试CMC,而不是表面张力测试法——摘要

Delta-8使用新方法测试CMC,而不是表面张力测试法——方法

Delta-8使用新方法测试CMC,而不是表面张力测试法——结果

Delta-8使用新方法测试CMC,而不是表面张力测试法——讨论